معلومة

الانقسام والكولشيسين

الانقسام والكولشيسين


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أنا أستعد للأولمبياد وأثناء قيامي ببعض الأوراق القديمة وجدت سؤالاً. لقد بحثت عنه في غوغل لكن الكثير من الناس لديهم إجابات مختلفة عليه. الرجاء المساعدة.

يعالج أحد الطلاب بعض أطراف جذر البصل باستخدام الكولشيسين المسؤول عن إيقاف انقسام الخلايا في مرحلة الطور (عن طريق إذابة ألياف المغزل) ثم أعد شريحة من تلطيخ طرف الجذر باستخدام الأسيتورسين (صبغة الكروماتين) وملاحظتها تحت قوة عالية من المجهر المركب . إنه يدرك جيدًا دورة الخلية الموجودة جنبًا إلى جنب.

سؤال: أي مما يلي لا يصح في ملاحظته؟
أ) معظم الخلايا في الطور البيني
ب) معظم الخلايا في الطور الطوري
ج) لا توجد خلايا في الطور أو الطور البعيد
د) يمكن ملاحظة الكروموسومات بشكل أفضل من الشريحة المحضرة بدون معالجة الكولشيسين.

حسب رأيي ، يجب أن تكون الإجابة (ج) لأنه إذا أوقف الكولشيسين انقسام الخلية في الطور الفوقي ، فلن تحدث الطور البعيدة والطور البعيد. لكن الكثير من الناس يقولون إنه يجب أن يكون (أ) أو (د). أنا في حيرة من أمري ، أي مساعدة ستكون موضع تقدير.


السؤال يطرح ما هو غير صحيح. أنت محق في أن C صحيحة - يجب العثور على عدد قليل جدًا من الخلايا في الطور أو الطور البعيد.

D صحيح أيضا. عندما يتم إذابة ألياف المغزل ، لن يتم تجميع الكروموسومات / الكروماتين بإحكام أو حزمها في الخلية وسيكون من الأسهل رؤيتها مع صبغة الأسيتورسين.

A و B إجابات خادعة. في الأنسجة العادية ، تكون معظم الخلايا في الطور البيني في أي وقت. الطور البيني هو فترة التشغيل المنتظمة للخلية.

ومع ذلك ، فإن السؤال يشير إلى جذر البصل نصائح التي تتكون أساسًا من خلايا تنقسم بنشاط (نسيج مرستيم). سيؤثر الكولشيسين على معظم الخلايا ويمكن العثور على معظم الخلايا موقوفة في الطور الفوقي. http://w3.marietta.edu/~biol/introlab/Onion٪20root٪20mitosis.pdf

لذلك ، بالنسبة لنصائح جذر البصل المعالجة بالكولشيسين ، لا توجد معظم الخلايا في الطور البيني. أ هي الإجابة الصحيحة.


تقوم مصفوفة بروتينية مشتقة من المواد النووية بتضمين جهاز مغزل الأنابيب الدقيقة أثناء الانقسام الفتيلي

تم اقتراح مفهوم مصفوفة المغزل منذ فترة طويلة. ومع ذلك ، ما إذا كان مثل هذا الهيكل موجودًا ، وما هو تركيبه الجزيئي والبنيوي ، فقد ظل أمرًا مثيرًا للجدل. في هذه الدراسة ، باستخدام نهج التصوير الحي في ذبابة الفاكهة الأجنة المخلوية ، نوضح أن البروتينات النووية تعيد تنظيمها أثناء الانقسام الفتيلي لتشكيل مصفوفة مغزل شديدة الديناميكية واللزوجة تضم جهاز مغزل الأنبوب الدقيق ، وتمتد من قطب إلى قطب. نوضح أن هذه المصفوفة "الداخلية" هي بنية متميزة عن مغزل الأنبوب الدقيق ومن غلاف مغزل يحتوي على صفائح B. عن طريق حقن ديكستران 2000 كيلو دالتون ، نظهر أن تفكيك الغلاف النووي لا يمثل حاجزًا للانتشار. علاوة على ذلك ، عندما يتم إزالة بلمرة الأنابيب الدقيقة باستخدام الكولشيسين قبل الطور الاستوائي مباشرة ، تتقلص مصفوفة المغزل وتتحد حول الكروموسومات ، مما يشير إلى أن الأنابيب الدقيقة تعمل كـ "دعامات" تمد مصفوفة المغزل. بالإضافة إلى ذلك ، نوضح أن بروتين مصفوفة المغزل Megator يتطلب مجاله الأميني الطرفي الملفوف الملفوف لتوطين مصفوفة المغزل ، مما يشير إلى أن التفاعلات المحددة بين جزيئات مصفوفة المغزل ضرورية لهم لتشكيل معقد محصور في منطقة المغزل. إن العرض التوضيحي لمصفوفة مغزل التضمين يضع الأساس لفهم أكثر اكتمالاً لديناميكيات الأنابيب الدقيقة وخصائص المغزل اللزج أثناء انقسام الخلية.


تثبيط الكولسيميد لنمو الخلايا وخصائص نشاط ملزم للكولسيميد في SACCHAROMYCES CEREVISIAE

في ظل ظروف الثقافة المقيدة ، نمو وتقسيم خميرة الخميرة على النقيض من ذلك ، لم يكن للعقار كولشيسين أي تأثير. لم يكن الاختلاف في حساسية الخميرة لهذين العاملين يعتمد على قدرتهما على اختراق الخلية ، بل كان يعكس اختلافًا متأصلًا في تقارب العقارين لموقع الارتباط الخلوي. تم تمييز جزء الربط بالترشيح الهلامي كجزيء ضخم يبلغ حوالي 110.000 مول بالوزن مع ثابت تقارب لـ Colcemid يبلغ 0.5 × 10 4 لتر لكل مول بالإضافة إلى ذلك ، تم الاحتفاظ بهذا الجزيء الكبير بواسطة مبادلات أيون ثنائي إيثيل إيثيل (DEAE). على أساس هذه الخصائص ، فإن مادة Colcemid المرتبطة بـ S. cerevisiae تم تحديد الخلايا مؤقتًا على أنها وحدات فرعية للأنابيب الدقيقة.


التغييرات في المؤشرات الانقسامية في جذور Vicia faba L: III. آثار الكولشيسين على أوقات دورة الخلية

جذور Vicia faba عولجت بمحلول الكولشيسين (0.000125-1.0 في المائة) لمدة 3 ساعات. تم تحديد ترددات المراحل المختلفة للانقسام والخلايا الرباعية الصبغية فور انتهاء العلاج وعلى فترات خلال الثلاثين ساعة التالية. 1.

1. باستثناء 0.000125 في المائة من الكولشيسين ، أحدثت جميع المعالجات تغييرات في أعداد الطور. بدا أن 0.00125-0.025 بالمائة من الكولشيسين يحث على التحفيز في الطور البيني الذي أدى ، بعد 4-6 ساعات ، إلى أعداد أعلى بكثير من النبوات. تسببت حلول 0.5 و 1 في المائة في حدوث انخفاض أولي في أعداد الطور الأولي ولكن كانت هناك زيادة تعويضية لاحقة. ساهم تحفيز الطور بشكل كبير في المؤشرات الانقسامية العالية الموجودة بعد العلاج.

2. امتد الطور الاستوائي ، مما أدى إلى تراكم الأطوار الفوقية. حدث هذا بعد كل العلاجات ماعدا 0.000125٪ كولشيسين. تحدث الزيادات الأكثر وضوحًا في عدد الطور الطوري في نفس الوقت تقريبًا مع الزيادات في النبوات أو بعدها مباشرة. يبدو أن تأخير الطور الطوري يستمر حوالي ساعتين.

3. تم قمع الطور الطوري بواسطة جميع المعالجات. تزداد فترة تثبيط الطور مع زيادة تركيزات الكولشيسين.

4. ظهرت الخلايا الرباعية الصبغية عند الطور الفوقي في أوقات مختلفة وبترددات مختلفة بعد علاجات بتركيزات مختلفة من الكولشيسين. لا يُظهر الوقت البيني لأسرع مجموعة من الخلايا الرباعية الصبغية أي ارتباط مباشر بتركيز الكولشيسين.

5. يغير الكولشيسين أوقات الدورة الانقسامية وبالتالي يعطل تجمعات الخلايا في النسيج الإنشائي ، عن طريق التأثير على كل من الخلايا في الانقسام الخيطي والخلايا في الطور البيني. يقترح أن تأثيره في الطور البيني ناتج عن تغيير مستحث في توازن عوامل النمو الداخلية. مهما كانت الآلية الكامنة ، فإن حركية الدورات الانقسامية تتغير لمدة 1-2 دورات على الأقل بواسطة الكولشيسين ولم تعد المجموعات المعالجة طبيعية.


التطورات الحديثة في مثبطات التيوبولين القائمة على تريميثوكسيفينيل (TMP) التي تستهدف موقع ربط الكولشيسين

تلعب الأنابيب الدقيقة (المكونة من مغاير α- و-tubulin) دورًا محوريًا في الانقسام والانقسام الخلوي ، وتعتبر هدفًا ممتازًا لعوامل العلاج الكيميائي لعلاج السرطان. هناك أربعة مواقع ربط فريدة في التوبولين والتي ترتبط بها التاكسانات وقلويدات فينكا ولوليماليد وكولشيسين على التوالي. في حين أن العديد من مثبطات التوبولين التي ترتبط بمواقع ربط تاكسين أو فينكا قد تمت الموافقة عليها من قبل إدارة الغذاء والدواء ، لا توجد حاليًا مثبطات توبولين معتمدة من إدارة الغذاء والدواء تستهدف موقع ربط الكولشيسين. تتمتع مثبطات توبولين التي ترتبط بموقع ربط الكولشيسين بمزايا علاجية مقارنة بالتاكسانات وقلويدات الفينكا ، على سبيل المثال ، يمكن تناولها عن طريق الفم ، ولديها إمكانات أقل للتفاعل بين الأدوية والعقاقير ، وتكون أقل عرضة لتطوير مقاومة الأدوية المتعددة. عادةً ما تحمل مثبطات التوبولين التي ترتبط بموقع ربط الكولشيسين جزء ثلاثي ميثوكسيفينيل (TMP) وهو أمر ضروري للتفاعل مع التوبولين. على مدى العقد الماضي ، تم تصميم وتركيب مجموعة متنوعة من الجزيئات التي تحمل جزء TMP كمثبطات لتوبيولين لعلاج السرطان. في هذه المراجعة ، نركز على نظائر TMP المصممة بناءً على CA-4 ، و indole ، و chalcone ، و colchicine ، وسقالات المنتجات الطبيعية المعروفة بتفاعلها مع موقع ربط الكولشيسين في توبولين. كما تمت مناقشة التحديات والاتجاه المستقبلي لمثبطات التوبولين القائمة على TMP بالتفصيل.

الكلمات الدالة: موقع ارتباط الكولشيسين بالسرطان مثبطات تريميثوكسيفينيل (TMP).


ن.ب.بوشكوف ، Tsitologiya 4 ، 396 (1960).

M. T. Gololobova ، In: Repair Processes in Vertebrates [بالروسية] ، موسكو ، 1959 ، ص. 266.

O.I Epifanova، Byull. اكسبير. بيول. 11 ، 113 (1958).

O.I Epifanova، Tsitologiya 2، 112 (1962).

L. N. Zhinkin ، A. A. Zavarzin ، and A.K Dondua ، Tsitologiya 6 ، 625 (1960).

أ. أوتكين ، الدراسة التجريبية لبعض مبادئ انقسام الخلايا في الكائن الحي. أطروحة دكتوراه ، سوخومي ، 1958.

E. P. Cronkite، V. P. Bond، T. M. Fliedner، et al.، In: Ciba Foundation Symposium on Haemopoiesis، London، 1960، p. 70.

C.D Darlington and L.F LaCour، The Handling of Chromosomes. لندن ، 1960.

N.P.Nowlton، Jr.، and W.R Widner، Cancer Res.، 1950، v. 10، p. 59.

د.مزية ، في: الزنزانة. نيويورك ، 1961 ، 1 ، ص. 79.

F.G. Sherman ، H. Quastler ، و D.R Wimber ، Exp. زنزانة. الدقة ، 1961 ، ص 25 ، ص. 114.

دبليو آر ويدنر ، جي بي ستورر ، وسي سي لوشبو ، Cancer Res. ، 1951 ، v. 11 ، p. 877.


تأثيرات الكولشيسين على البنية التحتية الدقيقة لتقسيم الخلايا النباتية ، وتمايز جدار الخشب ، وتوزيع الأنابيب الدقيقة السيتوبلازمية

لتوضيح الوظائف الممكنة للأنابيب الدقيقة في الخلايا النباتية ، تمت معالجة أنسجة شتلة القمح التي تنمو بنشاط مع الكولشيسين. في الخلايا المنقسمة ، اختفت الأنابيب الدقيقة من المغزل ، بغض النظر عن المرحلة في الدورة الانقسامية التي تم الوصول إليها قبل تطبيق الكولشيسين. لم يكن غزو المغزل بواسطة الأنابيب الدقيقة والشبكة الإندوبلازمية في الطور الطوري واضحًا ، ولم يتم العثور على تكوين لوحة الطور. تصبح كروموسومات الطور مبعثرة في جميع أنحاء السيتوبلازم. في الطور النهائي ، لم يحدث تكوين لوحة الخلية لخلايا ثنائية النواة ، ونواة على شكل دمبل ، وجدران قديمة غير مكتملة بين الخلايا في بعض الأحيان. في خلايا النسيج الخشبي ، اختفت معظم الأنابيب الدقيقة الجدارية في الخلايا الأصغر ، وتوجد تلك القليلة المتبقية في غزوات الجدار. مع الخلايا الأقدم قليلاً ، تشكلت سماكة الجدار ، لكن هذه كانت تفتقر تمامًا إلى أي انتظام في الحجم أو التوزيع على طول الجدار. تم العثور بشكل عام على عدد قليل من الأنابيب الدقيقة الموجودة بجانب السماكة. في وقت لاحق في التسلسل التنموي ، حدث ترسب كبير غير منتظم للجدار مما أدى إلى تكوين ثخانات مشوهة بشكل كبير ، وبدا النسيج الليفي الأساسي للجدار دون تغيير ، ولكن لم تكن الأنابيب الدقيقة موجودة في الوضع المعتاد فوق مثل هذه الكثافة. ظهر السيتوبلازم في جميع الخلايا المعالجة بشكل طبيعي بشكل عام ، باستثناء فقدان الأنابيب الدقيقة وأيضًا في بعض الأحيان بعض التغييرات في أنماط الريبوسومات المتعددة ، والتي توجد عادةً في شكل أنماط حلزونية معقدة ، غالبًا ما تنتشر بالتساوي على سطح الشبكة الإندوبلازمية. تمت مناقشة النتائج من حيث الأدوار المحتملة للأنابيب الدقيقة كعوامل حشوية تشارك في تخليق الألياف الدقيقة ، وتمايز الجدار ، والتشكل.


الأحداث البيوكيميائية للانقسام. I. تخليق وخصائص الكولشيسين المسمى بالتريتيوم في موطن الأسيتيل الخاص به *

مشاهدات المقالات هي مجموع تنزيلات النصوص الكاملة للمقالات المتوافقة مع COUNTER منذ نوفمبر 2008 (بتنسيق PDF و HTML) عبر جميع المؤسسات والأفراد. يتم تحديث هذه المقاييس بانتظام لتعكس الاستخدام حتى الأيام القليلة الماضية.

الاقتباسات هي عدد المقالات الأخرى المقتبسة من هذه المقالة ، ويتم حسابها بواسطة Crossref ويتم تحديثها يوميًا. العثور على مزيد من المعلومات حول عدد الاقتباسات Crossref.

درجة الانتباه Altmetric هي مقياس كمي للانتباه الذي تلقته مقالة بحثية عبر الإنترنت. سيؤدي النقر فوق أيقونة الكعك إلى تحميل صفحة على altmetric.com تحتوي على تفاصيل إضافية حول النتيجة ووجود وسائل التواصل الاجتماعي للمقالة المحددة. يمكنك العثور على مزيد من المعلومات حول "نقاط الانتباه البديلة" وكيفية احتساب النتيجة.

ملحوظة: بدلاً من الملخص ، هذه هي الصفحة الأولى للمقالة.


تفاعل الأدوية

كما ذكر أعلاه ، الكولشيسين هو ركيزة P-gp و CYP3A4. الأدوية التي تم الإبلاغ عنها والتي تسبب تسمم الكولشيسين هي مثبطات P-gp [42]. تشمل مثبطات P-gp مضادات الحموضة ، مثل المضادات الحيوية السيميتيدين ، مثل الإريثرومايسين وحاصرات قنوات الكالسيوم التتراسيكلين ، مثل ديلتيازيم وفيراباميل ، مثل مثبطات إنزيم بروتياز سيكلوسبورين وتاكروليموس ، مثل لوبينافير وريتونافيرول ومضاد للفطريات. الأدوية المضادة لاضطراب النظم ، مثل الأميودارون والكينيدين ومعدلات مستقبلات هرمون الاستروجين الانتقائية ، مثل عقار تاموكسيفين (https://www.fda.gov/drugs/postmarket-drug-safety-information-patients-and-providers/colchicine-marketed-colcrys -معلومة). تم الإبلاغ عن تفاعلات دوائية مهددة للحياة ومميتة في المرضى الذين عولجوا بالكولشيسين مع مثبطات P-gp و CYP3A4 القوية [42]. إذا كان العلاج بمثبط P-gp أو مثبط CYP3A4 القوي مطلوبًا في المرضى الذين يعانون من وظائف الكلى والكبد الطبيعية ، فقد يلزم تقليل جرعة المريض من الكولشيسين أو إيقافها لمنع السمية (https://www.fda.gov/drugs/ ما بعد البيع-الدواء-سلامة-معلومات-المرضى-ومقدمي-كولشيسين-تسويق-كولكريس-معلومات). اثنان فقط من التجارب السريرية للكولشيسين (https://www.fda.gov/drugs/postmarket-drug-safety-information-patients-and-providers/colchicine-marketed-colcrys-information).


نتائج

يتم توطين Rtnl1 و ReepB في منطقة perispindle وأقطاب المغزل أثناء الانقسام في جنين ذبابة الفاكهة المبكرة

من أجل التحقيق في ديناميات ER الانقسامية ، قمنا بتحليل الحركة وإعادة تنظيم ثلاث علامات ER: RFP-KDEL و Rtnl1-GFP و ReepB-GFP أثناء الانقسام الفتي للأديم المخلوي (الدورات 10-13) في جنين ذبابة الفاكهة المبكرة (الشكل 1). تم حقن الأجنة التي تعبر عن تسلسل احتفاظ ER ، KDEL ، مدمجة مع علامة الفلورسنت الحمراء RFP (أحمر) مع توبولين المسمى HiLyte 488 وتم تصويرها خلال الدورة 11 (الشكل 1 أ). لاحظنا تراكم غشاء ER في الغلاف النووي في الطور الأولي. عند انهيار الغلاف النووي (NEB) في الطور المسبق ، انتقل RFP-KDEL إلى مناطق أعمدة الدوران والمغزل. عندما تشكل المغزل الانقسامي ، أصبح ER أكثر تركيزًا حول المغازل أثناء الطور الطوري (الشكل 1 أ ، رؤوس الأسهم).

لتوظيف نهج كمي في قياس حركة غشاء ER ، حددنا مناطق الاهتمامات (ROIs) في أقطاب المغزل عندما أصبحت مرئية من الناحية الشكلية ، ثم أشرنا إلى تلك المواقع لوضع عوائد الاستثمار على مغازل في نقاط زمنية قبل الانقسام عندما لا تكون مرئية شكليًا. تُظهر الملاحظات السابقة ، بالإضافة إلى الدراسات السابقة [34] حركة أقطاب المغزل أثناء تشكيل NEB والمغزل ، ومع ذلك ، لم تؤثر هذه الحركة على طريقتنا في اختيار العائد على الاستثمار نظرًا لأنها تحدث عندما تكون المغازل مرئية بالفعل شكليًا (الشكل 1 أ و 1 ب) ). قمنا بفحص حركة أعمدة المغزل قبل بدء الانقسام الفتيلي من خلال الطور الطوري في أجنة RFP-KDEL و Rtnl1-GFP المحقونة بتوبيولين المسمى الفلورسنت. أظهرت قياسات اتجاه قطب المغزل [x ، y] في أجنة RFP-KDEL المحقونة بـ Tubulin HiLyte 488 ميلًا هزازًا صغيرًا بمقدار 5 درجات حول محور مركزي ، مما يشير إلى أن موضع المغزل يتأرجح حول نقطة ثابتة قبل الانقسام من خلال الطور الاستوائي ( الشكل 1 أ). لاختبار نموذج خطي ، قمنا بحقن صغير Tubulin HiLyte 647 في 3 أجنة Rtnl1-GFP وحركة مغزل كمية حول النواة في إشارة إلى T0 (نقطة زمنية 0) لـ 20 مغزل لكل جنين (الشكل 1B n = 3 p = 0.0040 ، 0.0029 ، 0.0025 R 2 = 0.9038 ، 0.9511 ، 0.9567). قبل NEB ، كان الخطأ القياسي لحركة المغزل المتوسطة بين الإطارات أقل من 0.3 ميكرومتر ، وهو أمر لا يكاد يذكر لاختيار العائد على الاستثمار بالنظر إلى أننا استخدمنا عائد استثمار دائري يبلغ 2 ميكرومتر. بعد NEB من خلال الطور الاستباقي ، كانت هناك زيادة في حركة المغزل بحد أقصى للإزاحة يبلغ 0.9 ميكرومتر ، ولكن هذا لا يكاد يذكر نظرًا لأن المغازل مرئية شكليًا في هذا الوقت. علاوة على ذلك ، فإن الافتقار إلى حركة عمود الدوران في الاتجاه [x ، y] قبل الانقسام الفتيلي مباشرة مكّن الاختيار الموثوق لعائد الاستثمار حتى 70 ثانية قبل أن تصبح مرئية شكليًا.

بعد ذلك ، قمنا بفحص تخصيب Rtnl1-GFP لأقطاب المغزل والنضوب من السيتوبلازم. تم اقتراح Rtnl1 لدفع تغييرات غشاء ER وتعزيز الانحناء وتشكيل الأنابيب [19]. تم تحديد الخط الموسوم Rtnl1-GFP في شاشة مصيدة البروتين [35] مع وجود علامة GFP في الإطار مع الموقع الداخلي للجين الشبكي. هنا ، استخدمنا Rtn1 كعلامة لـ ER أنبوبي وأنشأنا خطًا معدلاً وراثيًا يعبر عن كل من Rtnl1-GFP وعلامة الحمض النووي ، His2Av-RFP (H2-RFP) لمراقبة المراحل المختلفة للانقسام. أثناء الطور البيني ، انتشر توطين Rtnl1-GFP في جميع أنحاء السيتوبلازم ، ولكن عندما يدخل الجنين الانقسام ، أظهر Rtnl1-GFP تراكمًا قويًا في الغلاف النووي (الشكل 1C ، S1 Movie). في مرحلة ما قبل الطور ، نظرًا لعدم استقرار الغلاف النووي ، كان هناك توطين سريع ومركّز لـ Rtnl1-GFP في القطبين (الشكل 1C ، رؤوس الأسهم). Rtnl1-GFP المتراكمة عند القطبين أثناء الطور الاستوائي وتم العثور عليه على طول منطقة perispindle على غرار ما لوحظ مع KDEL. لتقدير هذه التغييرات ، قمنا بقياس إثراء عمود الدوران (النقاط الخضراء) ونضوب السيتوبلازم (النقاط الزرقاء) على أطر زمنية متتالية تقابل المراحل المبكرة من الانقسام (الشكل 1 د). أظهرت قياسات Rtnl1-GFP في الطور الأولي زيادة مطردة (T140: T245) في شدة عمود الدوران ROIs (النقاط الخضراء) ، وبلغت ذروتها حوالي 0.2 ضعفًا لكل من قياسات الكثافة القصوى والمتوسطة. بالنسبة لقياسات الشدة القصوى ، رأينا زيادة كبيرة (p & lt0.001) عند T140 لجميع العينات الثلاثة. بالنسبة لقياسات الكثافة المتوسطة ، رأينا زيادة كبيرة (p & lt0.001) عند T105 لجميع العينات الثلاثة. في المقابل ، هناك انخفاض تدريجي في شدة Rtnl1-GFP عند عائد الاستثمار السيتوبلازمي (النقاط الزرقاء) على نفس الإطار الزمني (T140: T315) لقياسات الكثافة القصوى والمتوسطة. أشارت هذه النتائج إلى حدوث تحول في توطين Rtnl1 من السيتوبلازم نحو أقطاب المغزل في الطور الطوري.

من أجل تأكيد هذه النتيجة لحركة Rtnl1 خلال المراحل المبكرة من الانقسام الفتيلي ، قمنا بفحص إعادة تنظيم بروتين تشكيل ER ، ReepB (الشكل 1E). وصفت الدراسات السابقة دور REEPs في تنظيم ER أثناء الانقسام وقدرتها على الارتباط بالأنابيب الدقيقة. على غرار ما لوحظ مع Rtnl1 ، أظهر ReepB تراكمًا في الغلاف النووي أثناء الطور الأولي وأعيد تنظيمه إلى أقطاب المغزل ومنطقة المحيط في الطور الفوقي. أظهرت قياسات ReepB-GFP في الطور الأولي زيادة مطردة (T140: T245) في شدة عائد الاستثمار لعمود المغزل (النقاط الخضراء) ، وبلغت ذروتها حول زيادة شدة قصوى بمقدار 0.4 ضعفًا و 0.2 ضعف متوسط ​​شدة زيادة. بالنسبة لقياسات الشدة القصوى ، شهدنا زيادة كبيرة (p & lt0.001) عند T140 لجميع العينات الثلاث بدءًا من T70. بالنسبة لقياسات الكثافة المتوسطة ، شهدنا زيادة كبيرة (p & lt0.001) عند T140 لجميع العينات الثلاثة ، حيث أظهرت اثنتان من العينات زيادة تبدأ عند T105 ، وأظهرت العينة الثالثة زيادة تبدأ عند T70. مرة أخرى ، قمنا بقياس انخفاض تدريجي في شدة ReepB-GFP في عائد الاستثمار السيتوبلازمي (النقاط الزرقاء) ومع ذلك ، لاحظنا إطارًا زمنيًا مختلفًا قليلاً. هنا رأينا أقصى كثافة للقياسات السيتوبلازمية تستنفد تدريجيًا بدءًا من T210 ، مع استنفاد متوسط ​​الكثافة السيتوبلازمية للقياسات بدءًا من T70. أشارت هذه النتائج أيضًا إلى حدوث تحول في توطين ReepB من السيتوبلازم نحو أقطاب المغزل في الطور الطوري.

يعرض Rtnl1 إثراءًا ثابتًا قبل إعادة التنظيم الرئيسية للطوارئ في وقت مبكر من الانقسام

أظهرت الدراسات السابقة أن هناك تراكمًا قويًا لغشاء ER عند القطبين بدءًا من الطور الأول ، بعد NEB ، من خلال الطور الطوري [11،17]. استنادًا إلى دراسات التوطين الخاصة بنا (الشكل 1) ، سعينا إلى متابعة ملاحظتنا للتوطين المبكر لـ Rtnl1 في الغلاف النووي وأعمدة المغزل في الطور المبكر المبكر. درسنا عن كثب توطين Rtnl1-GFP و RFP-KDEL أثناء الانتقال من الطور الأولي إلى الطور الأول أثناء الانقسام باستخدام الفحص المجهري البؤري (الشكل 2 أ). أظهرت صور التكبير المنخفضة توطينًا قصيرًا ولكن قويًا لـ Rtnl1-GFP في القطبين قبل توطين RFP-KDEL. أظهرت إدخالات التكبير العالية والقياسات الزمنية الدقيقة أثناء الطور المسبق أن Rtnl1-GFP المترجمة في أقطاب المغزل قبل 20 ثانية من توطين RFP-KDEL (الشكل 2 ب). قمنا أيضًا بتقدير هذا التوطين عن طريق قياس متوسط ​​وشدة التألق القصوى لـ Rtnl1-GFP و RFP-KDEL في القطبين (الشكل 2C) كما هو موضح سابقًا في (الشكل 1C و 1E - النقاط الخضراء) تم أخذ قياسات الكثافة أثناء الطور البيني وقياسها طوال الوقت. الانقسام (النقطة الزمنية 0-890 ثانية). تمت الإشارة إلى بدء وتوقيت الطور المسبق من خلال انهيار الغلاف النووي الذي يظهره اختفاء Lamin B (S1 Fig). أظهرت قياسات شدة الفلورسنت لـ Rtnl1-GFP زيادة مطردة وإثراءًا للكثافة عند العائد على الاستثمار بين 0-540 ثانية قبل NEB ، (0.0102 ميل 1 ، خط أخضر) بينما على النقيض من ذلك ، هناك زيادة طفيفة في RFP-KDEL خلال نفس الوقت فترة (-0.0045 ميل 1 ، خط أحمر). من النقاط الزمنية 540-660 هناك زيادة كبيرة في RFP-KDEL عند العائد على الاستثمار (0.1116 ميل 2 ، خط أحمر) مقارنة بـ Rtnl1-GFP (0.06733 ميل 2 ، خط أخضر). نستنتج هنا أن توطين Rtnl1 يعرض إثراءًا ثابتًا في أعمدة المغزل قبل التراكم الأكبر لغشاء ER في وقت مبكر من الانقسام.


شاهد الفيديو: mitosis 3d animation Phases of mitosiscell division (ديسمبر 2022).