معلومة

5.2: قياس الطيف الضوئي - علم الأحياء

5.2: قياس الطيف الضوئي - علم الأحياء


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

تستجيب العين البشرية للإشعاع الكهرومغناطيسي ضمن نطاق من الأطوال الموجية بين 400-750 نانومتر (أي "الطيف المرئي"). سينظر الدماغ إلى عينات الضوء التي تحتوي على طيف مستمر لجميع الأطوال الموجية بين 400-750 نانومتر على أنها "ضوء أبيض" (على سبيل المثال ، ينظر الدماغ إلى الضوء الذي يشتمل على طول موجي محدد ضمن هذا النطاق على أنه "ملون":

  • ~ 400nm = "بنفسجي"
  • ~ 450 نانومتر = "أزرق"
  • ~ 500 نانومتر = "أخضر"
  • ~ 550nm = "أصفر"
  • ~ 600 نانومتر = "برتقالي"
  • ~ 700nm = "أحمر"

غالبًا ما تظهر الكائنات ملونة بسبب استيعاب من الضوء داخل مناطق انتقائية من الطيف المرئي. يتكون الضوء المنبعث من هذه الأشياء التي تصطدم بأعيننا (التي ندرك لونها) من تلك الأطوال الموجية التي يتألف منها الكائن لم تمتص.

على سبيل المثال ، تحتوي أوراق النبات على صبغتين من أصباغ التمثيل الضوئي: الكلوروفيل أ والكلوروفيل ب. جزيء الكلوروفيل أ لديه القدرة على امتصاص الضوء بطول موجة يتراوح بين 430 و 660 نانومتر ؛ يمتص جزيء الكلوروفيل ب الضوء بطول موجي في حدود 450 و 640 نانومتر. وبالتالي ، فإن هذين الصباغين في الأوراق يمتصان أطوال موجات الضوء البنفسجي / الأزرق والبرتقالي / الأحمر (يتم نقل الطاقة التي تمثلها هذه الفوتونات إلى جزيئات الكلوروفيل). لا يمتص أي من الجزيئين الضوء مع أطوال موجية في حدود 500-600 نانومتر. وهكذا ، بعد تفاعل ضوء الشمس مع الأوراق ، تكون الأطوال الموجية المتبقية (والتي يمكن لأعيننا إدراكها) هي الأخضر والأصفر. لذلك ، فإن النباتات "خضراء" لأنها لا تمتص الضوء الأخضر.


  • كيف سيبدو الجسم إذا احتوى على صبغة تمتص جميع الأطوال الموجية من 400-750 نانومتر؟ سيكون "أسود"
  • هذا هو نفس الوضع في غرفة مغلقة مع إطفاء الأنوار. بدون ضوء لا يوجد لون.

إذا كانت لدينا عينة من عصير الأوراق المحتوية على الكلوروفيل A و B ، فيمكننا تحديد تركيز الكلوروفيل بكمية الضوء البنفسجي / الأزرق والبرتقالي / الأحمر الذي يمتصه. لا يمكننا قياسه بكمية الضوء الأخضر المنقول (سيكون بشكل أساسي نفس الكمية بغض النظر عن كمية الكلوروفيل:

الشكل 5.1.1: انتقال ضوء الكلوروفيل

على الرغم من أن العينة "أكثر خضرة" مع تركيزات أعلى من الكلوروفيل ، هذا صحيح ليس بسبب زيادة شدة الطول الموجي الأخضر للضوء ؛ إنه بسبب أ تخفيض في الأطوال الموجية للضوء البنفسجي / الأزرق والبرتقالي / الأحمر. هذا هو تخفيض يمكننا استخدامها تقدير تركيز الكلوروفيل. على الرغم من أن العينة تبدو خضراء ، لا يمكننا تحديدها كميًا من خلال مراقبة الطول الموجي الأخضر للضوء.

الضوء والطاقة والبنية الجزيئية

الضوء مادة غريبة ، إنه شكل إشعاعي لنقل الطاقة ، ولكي نفهم خصائصه علينا أن نعتبره يمتلك خصائص موجية وجسيمية. تختلف الأطوال الموجية المختلفة للضوء في الطاقة التي تحملها ؛ تتناسب الطاقة طرديًا مع تردد الضوء (كلما زاد التردد ، زادت الطاقة):

ه α ن

وحدة الطاقة هي إرغ (1 جول = 107ergs) ووحدة التردد هي هيرتز (أي عدد الدورات في الثانية ، أو وحدات من الثانية فقط-1). ثابت التناسب هو ثابت بلانك ، حبقيمة ووحدات 6.6 × 10-27 إرغ ثانية

ه = حن

erg = (erg sec) (ثانية-1)

التردد (ن) للضوء يتناسب عكسيا مع الطول الموجي (ل):

ن α 1 /

التردد له وحدات من الثانية-1 والطول الموجي له وحدات متر. ثابت التناسب هو ج (سرعة الضوء) بقيمة ووحدات 3 × 108م / ثانية:

ن = ج (1 / λ) = ج / λ

هذه العلاقة صحيحة في الفراغ. ومع ذلك ، يمكن للمواد "الكثيفة بصريًا" إبطاء سرعة الضوء التي تتطلب التصحيح التالي للمعادلة أعلاه:

ن = ج /نل

أين ن هو "معامل الانكسار" للمادة وله قيمة> 1

لذلك ، فإن تتناسب طاقة الضوء عكسيا مع الطول الموجي:

ه = (حج) / (نل)

"الفوتون" هو وصف جسيمي (جسيم) للضوء الذي هو الناقل لـ "كوانتا" الطاقة المحددة في المعادلة أعلاه. عندما يمتص الجزيء الضوء فإنه ينقل كمية طاقته ، ويتوقف الفوتون عن الوجود. أين ذهبت الطاقة؟

  • ال الروابط الذرية والتركيب الكيميائي والإلكترونات من جزيء معين محدد الدول المثارة وأنماط الاهتزازات.
  • حددت هذه الحالات المثارة وأنماط الاهتزازات مستويات الطاقة فوق حالة الأرض.
  • يمكن للجزيء أن يتغير من الحالة الأرضية إلى الحالة المثارة (أو الوضع الاهتزازي) عند امتصاص كمية من الطاقة تساوي تمامًا الفرق بين الحالة الأرضية والحالة المثارة.
  • وبالتالي ، يمكن للجزيئات امتصاص الطاقة المرتبطة بأطوال موجية محددة من الضوء ، ويتم استهلاك الضوء في هذه العملية.

الشكل 5.1.2: مقياس الضوء

الروابط الذرية والتركيب الكيميائي والإلكتروني للجزيئات هي خصائص فريدة وتختلف من نوع جزيء إلى آخر.

  • وهكذا ، فإن تختلف الاختلافات النشطة بين الحالة الأرضية والحالة المثارة من نوع جزيء إلى آخر.
  • لذلك ، القدرة على التفاعل و تمتص الضوء، وتختلف الأطوال الموجية المحددة للضوء الممتص من نوع جزيء إلى آخر

يعد نمط الامتصاص المميز للأطوال الموجية المختلفة للضوء فريدًا لكل نوع من الجزيئات وهو نوع من البصمة الجزيئية التي يمكن استخدامها تحديد وتقدير الجزيئات

في مثال الكلوروفيل المذكور أعلاه ، يُطلق على شدة الضوء الذي يمر عبر العينة اسم "الضوء النفاذية"من العينة:

الشكل 5.1.3: نفاذية الضوء من الكلوروفيل

  • النفاذية هي رقم بلا أبعاد يختلف من 1 (نفاذية كاملة) إلى 0 (لا نفاذية - امتصاص كامل)

من المهم أن لاحظ الفرق بين النفاذية والامتصاص: هم انهم عكسيا متناسب

  • العينة ذات الامتصاص العالي لها انتقال منخفض للضوء

الشكل 5.1.4: امتصاص الكلوروفيل

كيف يتم قياس النفاذية (T) والامتصاص (A)؟

  • شدة الضوء الساطع على عينة تسمى الضوء الساقط ، أنا0
  • شدة الضوء المقاسة بعد المرور عبر العينة هي الضوء المرسل ، أنا
  • يتم تعريف النفاذية ، T ، على أنها النسبة I / I0 وستتنوع بين 0 و 1:

الشكل 5.1.5: النفاذية

كيف تتأثر النفاذية بتركيز العينة والحجم المادي (أي طول المسار)؟

  • إذا تم تقليل النفاذية بسبب الامتصاص بواسطة العينة ، فزاد التركيز (ج) ، وانخفاض النفاذية. بمعنى آخر ، النفاذية تتناسب عكسياً مع التركيز: (قانون بير)

تي α 1 /ج

  • وبالمثل ، كلما زادت سماكة العينة (أي كلما زاد حجم طول المسار من الضوء من خلال العينة) ، وانخفاض النفاذية. وبالتالي ، فإن النفاذية تتناسب أيضًا عكسياً مع طول المسار (ل): (قانون لامبرت)

تي α 1 /ل

وبالتالي ، فإننا نتوقع المعادلة المتعلقة T بـ ج و ل لأخذ الشكل العام لـ:

تي α 1 /cl

النفاذية تبين ينقص أضعافا مضاعفة مع زيادات في التركيز وطول المسار ، فإن المعادلة لها الشكل:

تسجيل T α 1 /cl

-logT α cl

ثابت التناسب هو معامل الانقراض ه:

-logT = εcl

نظرًا لأن قيم السجل بلا أبعاد ، فستظهر وحدات e على أنها تركيز معكوس ومسافة معكوسة (على سبيل المثال M-1سم-1)

يمكن كتابة المصطلح -logT الموجود على اليسار كـ log (1 / T) ويحدد معكوس العلاقة بين النفاذية T و ecl مصطلح. نظرًا لأن الامتصاص والنفاذية يرتبطان عكسيًا ، ال هcl يبدو أن المصطلح تعريف مناسب للامتصاصية (أ):

تسجيل الدخول (1 / T) = ε cl = أ
(قانون بير لامبرت)

قيم ε و ل

  • طول المسار ل عادة بوحدات من سم
  • معامل الانقراض المولي ε وحدات م-1 سم-1 وهو ثابت التناسب الذي يتعلق بامتصاص الضرس حلول
  • معامل الانقراض الجماعي ε 1% يشير إلى امتصاص 1٪ بواسطة المحلول الشامل. عادةً ما يشير هذا إلى محلول مائي يمكننا استخدامه للحصول على كثافة 1000 جم / لتر. لذلك فإن محلول مائي بنسبة 1٪ بالكتلة يشير إلى انحلال 10 جم / لتر أو أ 10 ملغ / مل محلول جزيء الفائدة.
  • بما أن امتصاص الجزيء هو دالة لطول الموجة (أي الامتصاص لا يساوي كل طول موجي) معامل الانقراض يجب أن يشير أيضًا إلى الطول الموجي. يتم ذلك عادةً باستخدام رمز منخفض:

ε 1%280 نانومتر = 14.5 جرام-1 L سم-1

· في هذه الحالة محلول 10 مجم / مل من الجزيء سيكون له قراءة امتصاصية تبلغ 14.5 (وحدات بلا أبعاد) عند l = 280 نانومتر (قد لا يكون الامتصاص عند أطوال موجية أخرى معروفًا). وحدات التركيز هي g / L ، وبالتالي فإن e سيكون لها أبعاد g-1 L سم-1.

العلاقة بين التغييرات في A و T و c

· العلاقة المباشرة بين A و c تعني وجود a العلاقة الخطية بين الامتصاصية والتركيز. إذا قمت بمضاعفة التركيز ، فسوف تتضاعف الامتصاصية ، إلخ.

· ال سجل عكسي يمكن تحديد العلاقة بين النفاذية والامتصاصية على النحو التالي:

T = 1/10أ

  • مضاعفة التركيز لذلك سوف ينتج عنه تخفيض النفاذية بمقدار 10 أضعاف. أجهزة قياس الامتصاصية (أجهزة قياس الطيف الضوئي) في الواقع قياس النفاذية، وبطبيعة الحال تصبح أقل دقة عند القيم المنخفضة للنفاذية. هكذا، كلما زادت قراءة الامتصاصية كلما قلت الدقة. معظم هذه الأجهزة غير دقيقة في قراءات الامتصاص> 1.5 (هذا يعمل ليكون عند النفاذية <3٪ من النفاذية الكاملة)

تصميم أجهزة قياس الطيف الضوئي

أجهزة قياس الطيف الضوئي هي أدوات دقيقة ، ومع ذلك ، فهي تشتمل من الناحية النظرية على عدد قليل نسبيًا من الأجزاء. سيبدو التصميم البسيط كالتالي:

الشكل 5.1.6: مقياس الطيف الضوئي

  • يستخدم مصباح التنغستن لإنتاج أطوال موجية من الضوء تغطي النطاق المرئي ، بينما يستخدم مصباح الديوتيريوم لإنتاج ضوء يمتد عبر نطاق الأشعة فوق البنفسجية.
  • يتم ضبط المنشور المتحرك أو محزوز الحيود لتوجيه الطول الموجي للاهتمام نحو العينة
  • هذا مقياس طيف ضوئي "شعاع واحد" ويتم جمع البيانات المرجعية والعينة بشكل منفصل (تُستخدم العينة المرجعية لتحديد قيمة الإرسال القصوى (بشكل فعال I0)

يمكن أن يسمح تعديل هذا التصميم ، مقياس الطيف الضوئي "مزدوج الشعاع" ، بقياس I و I في وقت واحد0:

الشكل 5.1.7: مطياف شعاع مزدوج

يسمح كل من الكاشفات الأحادية والمزدوجة للمحقق بمراقبة خصائص الامتصاص لـ a طول موجي واحد من الضوء (الطول الموجي المحدد بواسطة إعدادات المنشور / الشق. تعديل يتضمن مجموعة من الكاشفات يمكن أن تسمح بالقياس المتزامن لطيف من الأطوال الموجية:

الشكل 5.1.8: القياس المتزامن للطيف

أطياف الامتصاص للجزيئات البيولوجية

البروتينات

لا تمتص البروتينات في الطول الموجي المرئي ما لم يكن لديها مجموعة صناعية (على سبيل المثال Fe2+) أو حمض أميني غير طبيعي. ومع ذلك ، فإن الأحماض الأمينية التربتوفان والتيروزين والسيستين تمتص الضوء في الطول الموجي للأشعة فوق البنفسجية:

الشكل 5.1.9: امتصاص التربتوفان

  • يمتلك التربتوفان ذروة امتصاص عند 280 نانومتر في نطاق الأشعة فوق البنفسجية
  • هذا طول موجي مفيد لقياس امتصاص التربتوفان
  • نظرًا لأن الامتصاص يتناسب مع التركيز ، فهذه طريقة مفيدة لقياس تركيز البروتين (للبروتينات التي تحتوي على Trp)

احماض نووية

تمتص الحلقات العطرية في قواعد الأحماض النووية أيضًا في نطاق الأشعة فوق البنفسجية:

الشكل 5.1.10: امتصاص الحمض النووي

  • كل قاعدة DNA و RNA لها طيف امتصاص مختلف قليلاً
  • 260 أو 280 نانومتر هو طول موجي مفيد عادة لمراقبة تركيز الأحماض النووية

لاحظ أن عينات الأحماض النووية والبروتينات يمكن أن تمتص على حد سواء عند 280 نانومتر ، لذلك يجب أن تكون عينات الجزيئات البيولوجية نقي من أجل القياس الكمي باستخدام التحليل الطيفي لامتصاص الأشعة فوق البنفسجية.


علم الأحياء OER

Credit: Inductiveload، NASA (CC-BY-SA 3.0) الضوء هو نوع من الطاقة ينتقل كجسيم موجي. الطول الموجي الضوء هو المسافات بين القمم في الأمواج أثناء انتقال الضوء. تُقاس الأطوال الموجية بالنانومتر (نانومتر) وتمثل الأطوال الموجية المختلفة للضوء ألوانًا مختلفة. الضوء الأبيض هو مزيج من الضوء المرئي نطاق . الضوء ذو الأطوال الموجية الطويلة (الأشعة تحت الحمراء) والأطوال الموجية القصيرة جدًا (فوق البنفسجي) غير مرئي للإنسان ولكن يمكن ملاحظته بواسطة الكائنات الحية الأخرى. مع انخفاض الطول الموجي ، تزداد طاقة الضوء.

يكشف انحراف الضوء عبر المنشور مكونات الأطوال الموجية للضوء.


التجارب

فيما يلي تجارب اختارها اختصاصيو العلوم لدينا لدعم موضوع البكالوريا الدولية *.

تطور سيلوبايز في الفطريات

في هذا النشاط التمهيدي ، ستقوم (1) بإنتاج مستخلص فطر الزر ، (2) تفاعل هذا المستخلص المحتوي على السيلوبايز مع الركيزة ، (3) جمع العينات بعد 1 ، 2 ، 3 ، 4 ، 6 دقائق من التفاعل ، (4) ) استخدم مقياس الطيف الضوئي لقياس امتصاص العينات الملونة ، (5) ارسم رسمًا بيانيًا للامتصاصية ضد. الوقت ، و (6) استخدم الرسم البياني لتحديد معدل تفاعل خلية السيلوبايز المحفز.

بعد الانتهاء من النشاط التمهيدي ، ستستخدم المصادر المرجعية أولاً لمعرفة المزيد عن الفطر ونشاط السيلوبايز وتطور وبيئة عيش الغراب قبل أن تختار وتحقق في سؤال قابل للبحث يتعلق بالخلية وتطور الفطر. بعض الموضوعات التي يجب مراعاتها في البحث المرجعي الخاص بك هي:

  • السليلوز
  • السيلوبيوز
  • سيلوبايز
  • قاعدية
  • أسكوميكوتا
  • mycorhizal
  • علم البيئة
  • تطور

تطور الخميرة

في هذا النشاط التمهيدي ، سوف تستخدم CO2 مستشعر غاز لتحديد معدل تنفس الجلوكوز بواسطة خميرة الخباز & # 8217 s.

بعد الانتهاء من النشاط التمهيدي ، سوف تستخدم أولاً المصادر المرجعية لمعرفة المزيد عن سلالات الخميرة المستخدمة في الخبز والتخمير قبل أن تختار وتحقق في سؤال قابل للبحث يتعامل مع تطور الخميرة من خلال الانتقاء الاصطناعي. بعض الموضوعات التي يجب مراعاتها في البحث المرجعي الخاص بك هي:

  • خميرة الخميرة
  • Saccharomyces bayans
  • خميرة البيرة
  • خميرة النبيذ
  • الانتقاء الاصطناعي
  • تطور
  • الخبز
  • السكريات الأحادية
  • السكريات
  • الأيض

* برنامج دبلوم البكالوريا الدولية هو برنامج رسمي لمنظمة البكالوريا الدولية (IBO) الذي يصرح للمدارس بتقديمه. تم تطوير المواد المتاحة هنا بشكل مستقل عن منظمة IBO ولم يتم اعتمادها من قبلها.

معلومات عنا
اتصل بنا

احصل على تجارب مجانية وأفكار معملية مبتكرة وإعلانات المنتجات وتحديثات البرامج والأحداث القادمة وموارد المنح.

نظرة عامة على الخصوصية

يستخدم هذا الموقع ملفات تعريف الارتباط لتحسين تجربتك أثناء التنقل عبر الموقع. من بين ملفات تعريف الارتباط هذه ، يتم تخزين ملفات تعريف الارتباط المصنفة حسب الضرورة على متصفحك لأنها ضرورية لعمل الوظائف الأساسية للموقع. نستخدم أيضًا ملفات تعريف الارتباط الخاصة بطرف ثالث والتي تساعدنا في تحليل وفهم كيفية استخدامك لهذا الموقع. سيتم تخزين ملفات تعريف الارتباط هذه في متصفحك فقط بموافقتك. لديك أيضًا خيار إلغاء الاشتراك في ملفات تعريف الارتباط هذه. لكن إلغاء الاشتراك في بعض ملفات تعريف الارتباط هذه قد يكون له تأثير على تجربة التصفح لديك.

بسكويتنوعمدةوصف
شاتراالحفلة الثالثةأسبوع 1تستخدم لأداة الدردشة
CloudFlare (__cfduid)مثابرشهر واحدمستخدمة بواسطة خدمة CloudFlare لتحديد السعر
الموافقة على ملفات تعريف الارتباط: ضروريةحصة12 ساعةتستخدم للحفاظ على إجابة الموافقة على ملفات تعريف الارتباط لملفات تعريف الارتباط الضرورية
الموافقة على ملفات تعريف الارتباط: غير ضروريمثابرةسنة واحدةتستخدم للاحتفاظ بإجابة الموافقة على ملفات تعريف الارتباط لملفات تعريف الارتباط غير الضرورية
الموافقة على ملفات تعريف الارتباط: سياسة ملفات تعريف الارتباط المعروضةمثابرسنة واحدةتستخدم لتذكر ما إذا كان المستخدم قد شاهد سياسة ملفات تعريف الارتباط
فيسبوك بيكسلالحفلة الثالثة3 اشهرتُستخدم لتتبع النقرات والإرسالات التي تأتي من خلال إعلانات Facebook و Facebook.
تحليلات جوجل (_ga)مثابرسنتانتستخدم لتمييز مستخدمي Google Analytics
تحليلات جوجل (_gat)مثابر1 دقيقةتستخدم لخفض معدل طلب Google Analytics
تحليلات جوجل (_gid)مثابر24 ساعةتستخدم لتمييز مستخدمي Google Analytics
تحليلات HubSpotالحفلة الثالثةيختلفتُستخدم لتتبع إعدادات الموافقة والخصوصية المتعلقة بـ HubSpot.
جلسة PHPحصةحصةتستخدم لتخزين نتائج API للحصول على أداء أفضل
WooCommerce: عربة التسوقمؤقتحصة يساعد WooCommerce في تحديد متى تتغير محتويات سلة التسوق / البيانات.
WooCommerce: العناصر الموجودة في سلة التسوقحصةحصة يساعد WooCommerce في تحديد متى تتغير محتويات سلة التسوق / البيانات.
WooCommerce: جلسةمثابر2 أيام يساعد WooCommerce من خلال إنشاء رمز فريد لكل عميل حتى يعرف مكان العثور على بيانات سلة التسوق في قاعدة البيانات لكل عميل.
ووردبريس: جلسة تسجيل الدخولجلسة مستمرةجلسة أو أسبوعين (إذا نقر المستخدم تذكرني)تستخدم بواسطة WordPress للإشارة إلى تسجيل دخول المستخدم إلى موقع الويب
WordPress: تفاصيل الحساب الآمنجلسة مستمرةجلسة أو أسبوعين إذا اختار المستخدم تذكر تسجيل الدخوليستخدمه WordPress لتخزين تفاصيل الحساب بأمان
ووردبريس: اختبار ملف تعريف الارتباطحصةحصةتستخدم بواسطة WordPress للتحقق مما إذا كان المتصفح يقبل ملفات تعريف الارتباط

تعد ملفات تعريف الارتباط الضرورية ضرورية للغاية لكي يعمل موقع الويب بشكل صحيح. تتضمن هذه الفئة فقط ملفات تعريف الارتباط التي تضمن الوظائف الأساسية وميزات الأمان لموقع الويب. لا تخزن ملفات تعريف الارتباط هذه أي معلومات شخصية.

أي ملفات تعريف ارتباط قد لا تكون ضرورية بشكل خاص لكي يعمل موقع الويب ويتم استخدامها خصيصًا لجمع بيانات المستخدم الشخصية عبر التحليلات والإعلانات والمحتويات الأخرى المضمنة تسمى ملفات تعريف ارتباط غير ضرورية.


التحديد الطيفي لتركيز البروتين

تصف هذه الوحدة طرق القياس الطيفي واللون لقياس تركيز عينة البروتين في المحلول. تم قياس الامتصاصية عند 280 نانومتر (أ280) لحساب تركيز البروتين بالمقارنة مع منحنى قياسي أو قيم الامتصاصية المنشورة لهذا البروتين (أ280). بدلاً من ذلك ، يتم قياس الامتصاصية عند 205 نانومتر (أ205) لحساب تركيز البروتين. ال أ280 و أ205 يمكن استخدام الطرق لتحديد البروتين الكلي في المحللات الخام والبروتين المنقى أو المنقى جزئيًا. يمكن استخدام مقياس التألق الطيفي أو مقياس التألق المرشح لقياس انبعاث التألق الجوهري لمحلول العينة ، حيث تتم مقارنة هذه القيمة بالانبعاثات من الحلول القياسية لتحديد تركيز العينة. يتم استخدام طريقة الانبعاث الفلوري لتحديد كمية البروتين المنقى. هذه الطريقة البسيطة مفيدة لعينات البروتين المخفف ويمكن إكمالها في فترة زمنية قصيرة. هناك طريقتان للقياس اللوني: طريقة برادفورد اللونية ، بناءً على ربط صبغة كوماسي الزرقاء اللامعة بالبروتين المعني ، وطريقة لوري ، التي تقيس التفاعل اللوني لبقايا التيروزيل في عينة البروتين.


راجع صحائف بيانات السلامة (SDS) لمعرفة المخاطر واحتياطات المعالجة المناسبة.

7.3 إجراءات التشغيل ذات الصلة

7.4.1 50 ملي محلول خلات الصوديوم ، درجة الحموضة 5.0 عند 37 درجة مئوية

7.4.1.1 تحضير 200 مل في الماء منزوع الأيونات باستخدام 1.36 جم من خلات الصوديوم ، ثلاثي هيدرات ، المنتج. رقم S8625. اضبط على الرقم الهيدروجيني 5.0 عند 37 درجة مئوية مع 1N HCl ، Prod. رقم H3162.

7.4.2 5٪ (وزن / حجم) محلول سيغماسيل (سيغماسيل)

7.4.2.1 قم بإعداد 100 مل في محلول أسيتات الصوديوم سعة 50 ملي مولار باستخدام 5 جم من سيغماسيل ميكروكريستالين النوع 20 ، المنتج. رقم S3504. اخلطيها وسخنيها برفق لعمل تعليق موحد.

7.4.3 قارورة تقدير الجلوكوز (هونج كونج)

7.4.3.1 استخدام كاشف فحص الجلوكوز (هونج كونج) ، إنتاج. رقم G3293. قم بإذابة المحتويات لكل تعليمات التسمية.

7.4.4 محلول إنزيم السليولاز (سليولاز)

7.4.4.1 مباشرة قبل الاستخدام ، قم بإعداد محلول يحتوي على 2-6 وحدات / مل من السليولاز في الماء البارد منزوع الأيونات.

7.5.1 الماصة (بالملليلترات) في أنابيب الاستزراع الزجاجية البورسليكاتية التي تستخدم لمرة واحدة:

7.5.1.3 قم بخلط كلا من الاختبار والفارغ على الفور عن طريق الدوران. باستخدام حمام شاكر ، احتضن كلا الاختبارين والفارغ عند 37 درجة مئوية لمدة 120 دقيقة بالضبط مع اهتزاز معتدل.

7.5.1.4 انقل كلاً من الاختبار والفراغ على الفور إلى حمام جليدي. اسمح لكل منهم بالوقوف حتى يتم تسوية التعليق. أجهزة الطرد المركزي عند 4000 دورة في الدقيقة تقريبًا لمدة دقيقتين تقريبًا للتوضيح. استخدم المادة الطافية في الخطوة 7.5.2.2.

7.5.2 الماصة (بالملليلترات) التالية في الأكواخ المناسبة:

7.5.2.1 توازن عند 25 درجة مئوية. مراقبة أ340 نانومتر حتى ثابت ، باستخدام مقياس الطيف الضوئي الحراري المناسب. سجل الأولي أ340 نانومتر لكل من الاختبار والفراغ.

7.5.2.3 الخلط على الفور عن طريق الانعكاس وتسجيل الزيادة في A340 نانومتر حتى الاكتمال (لمدة 5 دقائق تقريبًا). الحصول على النهائي A340 نانومتر لكل من الاختبار والفراغ.

7.6.1 ΔA340 نانومتر اختبار = أ340 نانومتر نهائي الاختبار - أ340 نانومتر الاختبار الأولي

7.6.2 ΔA340 نانومتر فارغ = أ340 نانومتر نهائي فارغ - أ340 نانومتر مبدئي فارغ

340 نانومتر اختبار - Δ340 نانومتر فارغ) (3.1) (5) (DF)

7.6.3.1 3.1 = الحجم النهائي (بالملليترات) من الخطوة 7.5.2

7.6.3.2 5 = الحجم الإجمالي (بالملليترات) لمزيج التفاعل في الخطوة 7.5.1

7.6.3.4 6.22 = معامل الانقراض بالمللي مولار لـ β-NADH عند 340 نانومتر

7.6.3.5 2 = عامل التحويل من ساعتين إلى ساعة واحدة حسب تعريف الوحدة

7.6.3.6 1 = الحجم (بالملليترات) من السليلاز المستخدم في الخطوة 7.5.1

7.6.3.7 0.1 = الحجم (بالملليترات) من الخطوة 7.5.1 المستخدمة في الخطوة 7.5.2


شاهد الفيديو: Lec 1 1 spectrophotometry ppt (قد 2022).